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Titre : | Validation dune méthode analytique alternative aux CFU pour le dénombrement de cellules bactériennes et de levures |
Auteurs : | Laure De Moffarts, Auteur ; Romain Kinet, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2023 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Mots-clés: | Cytomètre ; CFU ; dénombrement cellulaire |
Résumé : |
Le but de ce travail est de valider la méthode de comptage des cellules en utilisant la cytométrie de flux et différentes colorations. Dans le milieu de la recherche, l'utilisation de la culture à haut débit est de plus en plus courante. Ce type de méthode permet, par exemple, de tester différentes conditions de culture pour trouver les plus favorables à la croissance d'un microorganisme particulier. La méthode courante de dénombrement est la CFU. Cette méthode est une référence dans de nombreux protocoles, mais elle
présente des inconvénients. Le premier inconvénient est qu'il faut attendre une incubation pour obtenir les résultats du comptage cellulaire car cette méthode est une culture sur boite, le second est le temps qu'il faut pour étaler et compter les colonies. La nouvelle méthode de comptage des cellules est plus rapide pour la préparation de l'échantillon et pour l'interprétation des résultats. La méthode qui utilise le cytomètre en flux sera validée dans ce travail uniquement pour une bactérie E. coli et pour une levure S. cerevisiae. Ces micro-organismes sont utilisés car ils sont les plus utilisés dans le département de recherche de l'entreprise où j'ai effectué mon stage. La validation nécessite plusieurs étapes. Premièrement, nous devons créer une base de travail, une culture cellulaire. Ensuite, nous devons traiter cette culture. Le traitement comprend une dilution de la culture, un traitement d'une partie de la culture avec de l'éthanol pour créer un panel de cellules mortes, et la coloration des échantillons. Enfin, nous avons effectué une analyse statistique des résultats obtenus afin de vérifier si nous pouvions effectivement remplacer la méthode CFU par la méthode de dénombrement par cytomètre.En conclusion, nous pouvons confirmer que la méthode de dénombrement par cytomètre en flux est validée pour la bactérie E. coli et pour la levure S. cerevisiae. Une validation de cette méthode sera effectuée sur d'autres micro-organismes si ces derniers sont utilisés pour la culture à haut débit. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | GSK |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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