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Titre : | Etude de la régulation de la compétence chez Lactococcus lactis |
Auteurs : | Khadija Akkoubi, Auteur ; Pascal Hols, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2023 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Mots-clés: | Lactococcus lactis ; Compétence ; Tests de transformation ; Cellules électrocompétentes ; Électroporation ; Taux de transformation ; Protéine DprA ; Protéine ComX ; Mutagenèse aléatoire ; Promoteurs de compétence. |
Résumé : |
La compétence pour la transformation naturelle de l'ADN joue un rôle crucial dans l'échange génétique et l'adaptation. Cette étude examine la régulation de la compétence chez Lactococcus lactis, une bactérie non pathogène à Gram positif renommée pour ses capacités de production d'acide lactique. L. lactis trouve de nombreuses applications dans l'industrie alimentaire, la biotechnologie et la pharmacie. La recherche comprend deux projets visant à améliorer le taux de transformation naturelle et à identifier les acteurs clés impliqués dans l'activation de la compétence. Le projet 1 se concentre sur l'évaluation de l'effet de la co-expression de la protéine DprA avec la protéine ComX sur le taux de transformation de L. lactis. Seize souches de L. lactis ont été soumises à l'électroporation avec le plasmide pGhPxylT-comX-dprA. Les résultats ont révélé des impacts variables de la co-expression de DprA sur les taux de transformation, allant d'effets positifs à des effets potentiellement négatifs ou neutres. Notamment, la souche SL12675 a montré une amélioration remarquable de 3000 fois des taux de transformation grâce à la co-expression de DprA. Le projet 2 vise à identifier les éléments cruciaux responsables de l'activation de la compétence chez L. lactis. La mutagenèse aléatoire sera utilisée pour générer des mutants, suivie d'un criblage sélectif ciblant les promoteurs de compétence, PcomX et PcomGA. Le système de rapporteur de la phase précoce de compétence a été réalisé avec succès par l'amplification et l'intégration de la cassette PcomX-cat-spec. Cependant, l'amplification du fragment promoteur PcomGA pour le
système rapporteur de la phase tardive a échoué, nécessitant une synthèse d'ADN externe. Différentes techniques ont été utilisées tout au long de cette étude, comprenant la PCR conventionnelle et la PCR de recouvrement pour l'amplification de l'ADN, l'utilisation du kit de purification d'ADN Monarch® pour la purification de l'ADN, et la préparation de cellules électrocompétentes de L. lactis pour une meilleure absorption de l'ADN par électroporation. Des tests de transformation naturelle ont également été réalisés pour évaluer l'incorporation de l'ADN exogène dans les cellules de L. lactis. En conclusion, cette étude contribue à la compréhension de la régulation de la compétence chez L. lactis en électroporant avec succès 16 des 18 souches testées avec les plasmides pGhPxylT-comX et pGhPxylT-comX-dprA. La surexpression de ComX, induite par le xylose, confirme la transformation naturelle chez 15 des souches électroporées. La co-expression de DprA présente des impacts variables sur la transformation naturelle, soulignant la nature complexe de la régulation de la compétence chez L. lactis. Malgré les défis rencontrés dans la génération de constructions génétiques, un projet en cours utilisant la mutagenèse aléatoire s'efforce d'identifier de nouveaux régulateurs de la compétence. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | Biochemistry and Genetics of Microorganisms (BGM), Louvain Institute of Biomolecular Science and Technology (LIBST) - Université catholique de Louvain (UCL), Croix du Sud 4-5, 1348 Louvain-la-Neuve, Belgium |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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