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Titre : | Recellularisation de patchs acellulaires de fascia lata pour le traitement de pertes de substance osseuse critiques |
Auteurs : | Philippine Vanham, Auteur ; Julie Manon, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2022 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Mots-clés: | Recellularisation ; Périoste ; Différenciation |
Résumé : |
En cas de perte de substance osseuse critique suite à une résection tumorale, un gros traumatisme ou une ostéomyélite, une allogreffe massive est habituellement réalisée. Le greffon avasculaire provient alors dune banque de tissus et ne contient plus de cellules vivantes. Dès lors, ces transplantations donnent souvent lieu à des complications car les cellules hôtes ne colonisent que la surface du greffon.
La greffe dun périoste accompagnant celle du segment osseux pourrait permettre de surmonter ces complications en favorisant la consolidation de la lésion. Lingénierie tissulaire vise à produire un tissu non immunogénique et biocompatible pour le receveur de la greffe. Lobjectif de ce mémoire est de recellulariser des patchs de fascia lata acellulaires avec des cellules souches périostées (PMSCs) pour produire un périoste biocompatible fonctionnel. Dans un premier temps, les PMSCs sont mises en culture pour augmenter leur nombre. Les cellules sont ensuite ensemencées sur les patchs acellulaires par méthode statique et ces derniers sont ensuite incubés à 37°C et 5% de CO2, pendant 7 jours. Au cours de ce processus, la croissance cellulaire est évaluée à J1, J3, J5 et J7 grâce à la mesure de lactivité métabolique des cellules par Presto Blue. Ensuite, la viabilité cellulaire est évaluée au 7ème jour par une méthode fluorescente Live/Dead. Celle-ci permet de différencier les cellules vivantes en vert et les mortes en rouge. Une quantification est alors possible pour apporter une dimension quantitative à lévaluation de cette viabilité. Les patchs recellularisés sont enfin fixés dans le formol puis enrobés dans la paraffine pour réaliser des coupes histologiques. Afin dobserver la répartition et ladhérence cellulaires ainsi quévaluer la préservation de lintégrité structurelle de la matrice extracellulaire, une première partie de ces coupes histologiques est destinée à être colorée par Hématoxyline-Éosine (HE) et par trichrome de Masson et une seconde partie sera marquée grâce à une immunofluorescence collagène I + Hoechst. Dans un deuxième temps, une expérience de différenciation est réalisée. Des PMSCs sont mises en culture en présence de différentes sources potentielles de facteurs de différenciation. La différenciation ostéoblastique est ensuite évaluée par la coloration au Rouge Alizarine pour mettre en évidence les dépôts calciques et nodules osseux néoformés. Lanalyse quantitative du Presto Blue révèle une croissance positive des PMSCs sur les patchs tandis que celle du Live/Dead confirme une viabilité satisfaisante. Les colorations histologiques et limmunofluorescence démontrent une colonisation superficielle de la matrice se manifestant par une couche cellulaire continue et adhérente ainsi quune bonne préservation de la structure de la matrice sous-jacente. Létude de la différenciation suggère que los porcin aussi bien que los humain contiennent des facteurs nécessaires à la différenciation ostéogénique des PMSCs et ce en labsence de milieu de culture de différenciation spécifique contrairement au périoste ou au fascia lata. En conclusion, létape de recellularisation a été réalisée avec succès. Ces résultats prometteurs ouvrent la voie aux étapes suivantes dingénierie tissulaire vers une solution thérapeutique aux pertes osseuses critiques. Létude de la différenciation apporte de nouvelles perspectives quant aux facteurs de croissance contenus dans les différentes matrices |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | Pôle de Morphologie, IREC, UCLouvain |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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