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Titre : | Membranes de S. aureus Impact de lacide ursolique et de lacide oléanolique |
Auteurs : | Céline Vanosmael, Auteur ; Marie-Paule Mingeot-Leclercq, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2021 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Descripteurs : |
HE Vinci Terpènes |
Mots-clés: | Perméabilité des membranes cellulaires ; Staphylocoque aureus |
Résumé : |
La découverte des antibiotiques a révolutionné la prise en charge des patients infectés par des bactéries. Cependant, les bactéries sadaptent et développent des mécanismes de résistance à ces substances. De nouvelles stratégies sont donc importantes pour combattre les bactéries en particulier les bactéries multi-résistantes. La bactérie qui nous intéresse dans ce travail est le S. aureus qui a développé un phénotype de résistance suite à lexpression denzymes de type b-lactamases et dune protéine BPB2a.
Lapproche choisie par le laboratoire de pharmacognosie du LDRI est de partir de lexpérience acquise par la médecine traditionnelle afin de trouver des substances naturelles qui viendraient renforcer leffet des antibiotiques. Des études ont montré que deux composés présents dans les extraits du Vittelaria paradoxa: lacide ursolique et lacide oléanolique ont une activité antimicrobienne mais surtout une activité synergique avec les b-lactamines, antibiotique classiquement utilisés pour traiter les infections à S. aureus. Les composés induisent également une délocalisation de la protéine PBP2a du septum vers la périphérie. Ces effets induits par lacide ursolique et lacide oléanolique résultent probablement deffets au niveau de la membrane. Afin de comprendre comment lacide ursolique et lacide oléanolique interagissent avec la membrane de S. aureus deux propriétés biophysiques ont été étudiées : la capacité de fusion et la perméabilité membranaire. La fusion membranaire est suivie en utilisant la méthode du déquenching de fluorescence de loctadecylrhodamine B (R18) sur des modèles membranaires, les liposomes LUVs. Ceux-ci sont formés à partir des deux phospholipides les plus importants des bactéries de S. aureus, la cardiolipine (CL) et le palmitol-oléyl-phosphatidylglycérol (POPG) dans des proportions respective de 85:15 et 60:40. Les résultats ont mis en évidence un pouvoir fusogène de lacide ursolique et de lacide oléanolique qui dépend de leur concentration. Lacide ursolique présente un effet plus important que lacide oléanolique. Pour évaluer la perméabilité, nous avons déterminé si lacide ursolique pouvait traverser la membrane de S. aureus pour venir saccumuler dans son cytoplasme. Des souches de S. aureus MRSA ATCC 33591 ont été mises en contact avec de lacide ursolique puis isolées, lavées et lysées afin de récolter le milieu dincubation, les solutions de lavage et les lysats bactériens. Chaque échantillon est déposé sur des plaques HPTLC. La plaque est alors développée dans une chambre de migration saturée par une phase mobile n-hexane/éthylacétate/acétone (8.2/3.6/0.2 V.V.V) puis révélée par une solution de 10% acide sulfurique dans de léthanol. Lacide ursolique ainsi isolé des autres constituants est quantifié par densitométrie par le CAMAG TLC scanner III. Les résultats ont mis en évidence que lacide ursolique ne rentre quen très faible quantité dans le lysat bactérien et donc probablement dans le cytoplasme de la bactérie. La majorité de lacide ursolique se situe au niveau du milieu dincubation. En conclusion, on peut dire que lacide ursolique et lacide oléanolique interagissent sur les propriétés biophysiques de la membrane de la bactérie S. aureus. Lacide ursolique et lacide oléanolique sont tous les deux capables daugmenter la capacité de fusion des membranes lipidiques composées de palmitol-oléyl-phosphatidylglycérol et de cardiolipine. La perméabilité membranaire est quant à elle probablement faiblement modifiée par lacide ursolique puisquune infime proportion dacide ursolique est présente au niveau des lysats. Au-delà des effets observés, Si et comment lacide ursolique et lacide oléanolique induisent une synergie avec les b-lactamines vis-à-vis de S. aureus MRSA reste à déterminer. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | Louvain Drug Research Institue (LDRI) Cellular and Molecular Pharmacology unit (FACM) |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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