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Titre : | Manipulations génétiques en vue de la caractérisation de la surface et de la division cellulaire chez Brucella abortus |
Auteurs : | Laura Krolikowska, Auteur ; Xavier De Bolle, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2021 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Descripteurs : |
HE Vinci Biologie moléculaire |
Mots-clés: | génome bactérien ; techniques génétiques ; Brucella abortus ; système CRISPR-Cas ; microscopie de fluorescence |
Résumé : |
La version mobile du système CRISPRi est un outil génétique récent de plus en plus utilisé dans le monde scientifique. CRISPR (courtes répétitions palindromiques régulièrement espacées) est un système composé d'une protéine spécifique, la Cas9, et d'un ARN guide. Il a la capacité de cliver un ADN étranger. Une fois que l'ARN guide reconnait la cible à cliver, la Cas9 va se cliver à un endroit bien précis. Ce système de plus en plus répandu permet d'analyser les bactéries plus en profondeur d'un point de vue génétique. Il facilite entre autres l'étude de la résistance et de la sensibilité aux antibiotiques.
CRISPRi (CRISPR interférence) est l'une des variantes du système CRISPR. CRISPRi a une fonction plus spécifique, il permet l'inactivation de gènes. Ici, une protéine dCas9 (Cas9 inactivée) est utilisée. Sa fonction est de se lier à l'ADN à un endroit spécifique et de bloquer la transcription en stoppant l'activité de l'ARN polymérase. Malgré ses avantages, il est difficile de l'utiliser sur toutes les bactéries en raison des constructions laborieuses qui doivent être réalisées. C'est pourquoi les scientifiques ont récemment développé le système que nous allons étudier de plus près, qui est la version mobile. Le CRISPRi mobile permet ces modifications génétiques dans un panel plus diversifié de bactéries. Ceci est dû à une intégration dans le génome du gène glms très conservé chez les bactéries. L'aspect mobile du système est basé sur le système de transposition Tn7 qui s'intègre en aval de ce gène glms. Les transposons sont des éléments génétiques mobiles capables de se déplacer à l'intérieur des génomes. Dans l'étude sur laquelle se base notre projet, un large panel de bactéries a été testé. Cependant, le laboratoire dans lequel nous travaillons se concentre sur Brucella abortus. Nous avons donc poursuivi l'étude sur cette souche. Brucella est l'agent étiologique de la brucellose, l'une des zoonoses les plus répandues dans le monde. Les principaux hôtes de Brucella sont dépendants de l'espèce. Il sagit entre autres des bovins, ovins, caprins et porcidés. Environ 500.000 cas d'infections humaines sont signalés chaque année. L'homme n'est qu'un hôte accidentel et ne peut être infecté que par deux voies : les voies respiratoires ou le tube digestif. La première touche principalement touche principalement les éleveurs et les vétérinaires lorsqu'ils sont en contact direct avec des animaux infectés. La seconde est plus générale et est due à l'ingestion de produits laitiers non pasteurisés. Heureusement, la transmission interhumaine reste très rare. Le gène cible à modifier afin de vérifier si le système mis en place fonctionne est ctrA. Il a été démontré que lorsque ce gène est déplété, les bactéries générées présentent de fortes anomalies morphologiques. Une première analyse au microscope a indiqué que les bactéries étaient effectivement affectées. Cependant, le système s'est avéré peu fiable. Même si l'induction de l'IPTG a bien eu lieu, elle n'était pas détectable. Ainsi, un autre gène, omp25, codant pour une protéine de la membrane externe de la bactérie, a été ciblé. Pour résumer, la mise en place du système CRISPRi mobile pour Brucella n'est pas encore terminée, même si les premiers résultats semblent nous mener dans la bonne direction. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | URBM - UNamur |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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