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Titre : | Impact de différents systèmes de culture in vitro sur le stress oxydatif et la mort cellulaire dans le tissu testiculaire immature chez le porc |
Auteurs : | Alae El Bouazati, Auteur ; Marc KANBAR, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2021 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Descripteurs : |
HE Vinci Immunohistochimie ; Mort cellulaire ; Stress oxydatif |
Résumé : | La cryopréservation dun fragment de tissu testiculaire immature (TTI) contenant des cellules souches spermatogoniales(SSC) est la seule option expérimentale pour préserver la fertilité des garçons prépubères avant le traitement du cancer. La maturation in vitro (MIV) des cellules germinales qui peuvent être utilisées dans la fécondation in vitro (IVF) est lapproche la plus prometteuse pour la restauration de la fertilité. Cependant, la MIVvise à reproduire la spermatogenèse dans un système de culture. À ce jour, lutilisation de spermatozoïdes produits in vitro a abouti à des naissances chez la souris. Chez les grands mammifères et les humains, ce processus demeure largement inefficace. Il est donc important de développer des systèmes de culture qui imitent au mieux les conditions in vivo pour améliorer lefficacité de la spermatogenèse in vitro. Dans cette étude une comparaison des différences en termes de mort cellulaire et de stress oxydatif est effectué entre trois systèmes statiques (agarose-gel, agarose-gel avec puce depolydiméthylesiloxane, et insert de culture) et un système dynamique (microfluidique) utilisant le TTI de porcelets de 7 jours (n=3) et un milieu de culture décrit précédemment. La durée de culture était de 30 jours. Des fragments de tissus ont été récupérés et fixés dans le paraformaldéhyde à 4% aux jours 0, 5, 10, 20 et 30 pour les analyses. La peroxydation lipidique est une résultante du stress oxydatif où les aldéhydes sont produits en grandes quantités comme 4-HNE et MDA qui sont évalués par immunohistochimie. Et pour la mort cellulaire, une évaluation du nombre de cellules apoptotiques est faite par immunohistochimie pour caspase-3 et le TUNEL. Les résultats ont été interprétés à laide du logiciel Qupath et rapportés en pourcentage de cellules positives (cleaved caspase 3 et TUNEL) ou en utilisant un score semi-quantitatif (4-HNE et MDA).Lexpression de la caspase 3 clivé na pas varié de façon significative entre le début de la culture et sa fin (p=0,2), bien quil y ait eu une tendance à laugmentation du nombre de cellules apoptotiques dans tous les systèmes (p=0,31). De même, le TUNEL a montré une tendance croissante (non significative, p=0,23) dans le nombre de ruptures dADN, ainsi une tendance non significative entre les quatre systèmes (p=0,33). En ce qui concerne les marqueurs de peroxydation lipidique, les niveaux de 4-HNE ont diminué de façon significative (p=0,04) au cours de la période de culture, quel que soit le système de culture utilisé (p=0,15). Bien que les niveaux ont chuté à différents points de temps pour les différents systèmes. La chute significative la plus précoce a été observée dans le système microfluidique (au jour 5, p=0,0015) et la plus récente dans le système agarose-gel (au jour 30, p=0,04).Les niveaux de MDA sont demeurés constants dans tous les systèmes (p=0,6) pendant toute la durée de la culture (p=0,65).Et de limiter les dommages du stress oxydatif sur les tissus. En conclusion, les résultats montrent que la mort cellulaire se produit de la même façon pendant la durée de la culture dans tous les systèmes. Alors que les conditions de culture in vitro (température, humidité, milieu) semblent favorables et sont capables de diminuer (4-HNE) et de limiter (MDA) les dommages du stress oxydatif sur les tissus. Bien quaucune différence significative nait été observée entre les différents systèmes à ce stade, il nest pas exclu que cela puisse être dû au nombres déchantillons utilisés(n=3) ou au fait que le milieu de culture soit incomplet, ou à dautres voies de stress oxydatif. Lidentification dun système de culture pour la maturation in vitro de lITT porcine nécessite la gestion de nombreux paramètres afin dobtenir un résultat satisfaisant et ainsi commencer une application pratique chez lhomme. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | UCL - LIBST - FYMO |
Département : | Biologie médicale |
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