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Titre : | Étude de la spécificité de deux senseurs de phéromones, ScuR et SarF, chez Streptococcus salivarius |
Auteurs : | Dorian CANAS TORRES, Auteur ; Pascal Hols, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2021 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Mots-clés: | Streptococcus salivarius ; Transformation naturelle ; Régulateurs transcriptionelles |
Résumé : |
Le début des années 60 a marqué le pic de l'utilisation des antibiotiques. Cela a conduit à une résistance aux antibiotiques de nombreuses bactéries mais aussi à une augmentation des maladies nosocomiales. Il était donc nécessaire de trouver des alternatives aux antibiotiques pour traiter les infections bactériennes. Dès lors, l'une des alternatives est l'utilisation de bactériocines. Il s'agit de peptides bactériens dont le rôle est d'inhiber la croissance d'autres souches. Certaines espèces productrices de bactériocines peuvent avoir des effets positifs sur la santé humaine. Streptococcus salivarius est une bactérie commensale à Gram positif du système digestif humain et de la cavité buccale. La souche HSISS4 de Streptococcus salivarius utilisée dans ce travail est un candidat probiotique. Le système de communication ComRS découvert dans le laboratoire hôte régule l'expression des gènes codant pour la production de bactériocines et la compétence pour la transformation de l'ADN. La compétence est un état physiologique qui permet l'incorporation d'ADN exogène dans le matériel génétique de l'hôte. La souche HSISS4 est capable de synthétiser trois régulateurs transcriptionnels, ComR, ScuR et SarF, qui présentent de fortes similitudes entre eux. Ils possèdent un domaine de liaison à l'ADN N-terminal (domaine HTH) et un domaine de liaison aux peptides C-terminal (domaine TPR) interconnectés par une séquence de liaison non structurée.
L'objectif principal de ce travail est d'étudier la spécificité d'interaction de ces trois protéines homologues pour leur site de liaison à l'ADN. Pour cela, nous allons étudier comment ScuR, SarF et ComR se lient spécifiquement à l'ADN en utilisant des expériences in vivo et in vitro. Pour réaliser ces expériences, les domaines HTH des protéines seront permutés pour générer des protéines hybrides. Tout d'abord, pour les expériences in vivo, une série de transformations ont été effectuées pour intégrer des fragments de fusion codant pour les protéines hybrides dans le génome de la souche HSISS4. Les transformants résultants ont été cultivés, amplifiés, purifiés et séquencés. Les résultats du séquençage de l'ADN ont montré des incohérences. La difficulté de réaliser ces transformations en raison de problèmes potentiels de toxicité ou d'une faible efficacité de recombinaison nous a obligés à affiner le protocole de transformation. Deuxièmement, pour les expériences in vitro, nous avons cherché à étudier le rôle du linker. Il s'agit d'une petite séquence qui relie le domaine HTH au domaine TPR. À cette fin, nous avons effectué une série de purifications de protéines afin d'obtenir de nouvelles protéines hybrides. Ensuite, des essais de déplacement de mobilité ont été réalisés entre l'ADN et les protéines purifiées pour étudier l'interaction. En conclusion, nous avons mis en place un nouveau protocole pour les transformations naturelles chez S. salivarius. Malheureusement, les résultats des tests de mobilité ont montré une absence d'interaction entre l'ADN et la protéine, ce qui indique que nos protéines ne sont pas fonctionnelles. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | Biochemistry and Genetics of Microorganisms (BGM), Louvain Institute of Biomolecular Science and Technology, (LIBST), UCLouvain (UCL) |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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