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Titre : | Comparaison de la stabilité de lUbiquitine Carboxy-terminal Hydrolase (UCH) L1 humaine et de zebrafish par Fluorimétrie Différentielle à Balayage |
Auteurs : | Simon JONCKHEERE, Auteur ; J. Wouters, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Bruxelles : Institut Paul Lambin, 2021 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Chimie |
Résumé : | UCH-L1 est une protéine appartenant à la famille des déubiquitinases. Ces enzymes permettent de cliver le lien entre lubiquitine, une protéine de marquage, et la protéine cible et interviennent notamment au niveau du Système Ubiquitine Protéasome (ou UPS). De nombreuses études portent sur UCH-L1 car elle se trouve être impliquée dans différents cancers et maladies neurodégénératives. Il a également été montré que la protéine UCH-L1 retrouvée chez une espèce animale, zebrafish danio rerio, présente une séquence grandement similaire à la protéine humaine, bien que peu détudes supplémentaires aient été effectuées sur celle-ci. Peut-être car les deux protéines, malgré une similarité structurale importante, présentent des caractéristiques différentes, notamment du point de vue de leur stabilité comme il a pu être observé précédemment au laboratoire. En effet les deux protéines sont produites, séparément, en fusion avec un tag Glutathion S-Transférase et si le clivage de ce tag sur la protéine humaine ne pose pas de souci en pratique, il savère que la protéine de zebrafish précipite lors de cette étape. Le stage consistait donc en la recherche de conditions de stabilité optimale de ces deux protéines, en particulier pour lenzyme de zebrafish. Déterminer de telles conditions permettrait de stabiliser lenzyme et déviter quelle ne précipite lors du clivage du tag GST. Le travail expérimental sarticulait autour de deux axes, à savoir la production et la purification de lenzyme humaine, suivie dune étude de la stabilité des deux protéines par Fluorimétrie Différentielle à Balayage (ou DSF). Des souches bactériennes de Escherischia coli Rosetta 2 BL21 (DE3) sont utilisées pour la production, tandis que la purification se fait par FPLC daffinité. Le criblage de tampons par DSF permet ensuite de comparer la stabilité des deux enzymes dans ces différents tampons, à différentes gammes de pH. Linfluence du tag GST sur la protéine humaine est également analysée par DSF. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | UNamur - Laboratoire de Chimie Biologique Structurale |
Département : | Chimie |
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