| Titre : | Identification de l’interactome de PKR au cours de l’infection par le virus de Theiler |
| Auteurs : | Julien Hulet, Auteur ; Thomas Michiels, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2024 |
| Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
| Mots-clés: | Cardiovirus ; Virus de Theiler ; Protéine kinase R ; Phosphorylation ; Protéine Leader ; Protéine Ribosomiale S6 kinase ; 90-KDa ; APEX3 |
| Résumé : | Les virus, comme le virus de Theiler, réorganisent le métabolisme de leur hôte pour échapper à la réponse immunitaire. Ce virus inhibe l’activation de la kinase antivirale PKR pour éviter les défenses de l’hôte. PKR est normalement activée par la liaison à l’ARN double brin, généré lors de la réplication virale. PKR se dimérise et phosphoryle eiF2a, bloquant ainsi la traduction virale et cellulaire. Ce mécanisme d'évasion est orchestré par la protéine accessoire virale Leader (L). La protéine L, bien que dépourvue d'activité enzymatique a un rôle dans la persistance virale. La protéine L recrute les kinases RSK via son domaine central et dirige le complexe vers le pore nucléaire. La protéine leader recrute alors les FG-nucléoporines avec son domaine C-terminal permettant, dû à leur proximité, la phosphorylation de ces nucléoporines par RSK. Ce mécanisme entrainera le blocage de la production d’interférons, l’inhibition de l’activation de PKR et la perturbation du trafic nucléocytoplasmique. Il est possible de se demander si la perturbation du trafic nucléocytoplasmique est une cause de l’inhibition de PKR. Pour mieux comprendre le mécanisme d'inhibition de PKR, il est intéressant d’identifier l'interactome de PKR lors de l'infection. Pour ce faire, des cellules exprimant une protéine de fusion entre la peroxydase APEX et PKR ont été obtenues. APEX permet la biotinylation des protéines et acides nucléiques à proximité de la protéine de fusion. Il sera alors possible de purifier ces molécules biotinylées dans les cellules infectées par « pull-down » à la streptavidine et d'identifier les partenaires potentiels de PKR par spectrométrie de masse ou séquençage d'ARN. |
| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | Institut de Duve, Université Catholique de Louvain, Bruxelles, Belgique |
| Département du TFE : | Biologie médicale |
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