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Titre : | Mise en évidence des neurones de la moelle spinale humaine à laide de techniques histologiques et immunohistochimiques utilisant lanticorps anti-NeuN |
Auteurs : | Charlyne Coel, Auteur ; Guillaume Glaudot ; Catherine Behets, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2023 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Mots-clés: | neurone ; moelle spinale ; techniques histologiques ; immunohistochimiques ; antigène NeuN ; humains |
Résumé : |
En pratique clinique, l'examen le plus fréquemment utilisé pour mettre en évidence une atteinte de la moelle spinale est l'imagerie par résonance magnétique (IRM). Cependant, cette méthode est relativement imprécise. Une meilleure connaissance de l'organisation fine de la moelle spinale permettrait d'améliorer le diagnostic ainsi que la prise en charge des patients.
Ce projet consiste à optimiser et comparer des méthodes histologiques et immunohistochimiques utilisant l'anticorps anti-NeuN afin de mettre en évidence des groupements neuronaux spécifiques et répétitifs au sein de la moelle spinale humaine. Pour cela, 2 techniques de coloration et deux techniques immunohistochimie ont été testées : violet de crésyl, Klüver-Barerra, NeuN seul et NeuN avec contre coloration LFB. Les deux méthodes permettant de visualiser les neurones sont le violet de crésyl et NeuN seul tandis que Klüver-Barerra et NeuN avec contre coloration LFB permettent en plus de différencier la substance blanche de la substance grise. Divers paramètres d'optimisation ont été testé pour l'IHC : durée de fixation du tissu, dilution de l'anticorps primaire, méthode d'enrobage. Les résultats ont permis de déterminer que le LFB pour la coloration pour la coloration Klüver-Barerra perture l'observer des neurones. Quante à NeuN seul, bien que les neurones soit très bien mis en évidence par l'IHC, il est difficile de les situer dans la substance grise à cause de l'absence de repères. Ces deux techniques sont donc abandonnées pour la suite du projet. Les neurones sont plus facilement observables et repérables avec les deux autres techniques. Le violet de crésyl est une coloration simple et rapide néanmoins elle présente le désavantage de colorer également les cellules gliales, ce qui donne un marquage aspécifique des neurones. NeuN avec contre coloration LFB offre, lui, un très bon marquage spécifique mais tous les neurones ne sont pas marqués car certains d'entre eux ne présentent pas d'antigèse NeuN. Il s'agit aussi d'une méthode plus longue et compliquée. Les essais suivants n'ont pas encore permis de déterminer quelle technique est la plus adaptée pour la suite du projet. En conclusion, le violet de crésyl semble être la technique la plus prometteuse à ce stade. Elle est plus adaptée à la réalisation de coupes serrées et permet une bonne mise en évidence des neurones. Des tests supplémentaires doivent encore être réaliser pour confirmer cette position par rapport à NeuN avec contre coloration LFB |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | UCL-IREC-Pôle de morphologie |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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