| Titre : | Etude du complexe ComR/ADN/XIP |
| Auteurs : | Stéphanie De Mets, Auteur ; Patrice Soumillion, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2023 |
| Langues: | Français |
| Index. décimale : | TFE - Chimie |
| Résumé : |
L’état de compétence est un état physiologique pendant lequel les bactéries sont capables de prendre de l’ADN nu dans leur environnement et de l’intégrer dans leur génome via un mécanisme nommé la transformation naturelle. Chez la plupart des streptocoques, dont Streptococcus thermophilus, l’entrée en compétence est contrôlée par un système de « quorum sensing » nommé le système ComRS. Dans ce système, le facteur de transcription ComR lie la phéromone mature XIP dérivée de ComS pour permettre son activation. Ensuite, ComR induit une augmentation de la production de la pré-phéromone ComS et la production du facteur sigma σx qui est à l’origine de l’entrée en compétence. Le facteur de transcription ComR est donc connu comme l’effecteur du système ComRS.
ComR présente deux formes (active et inactive). La forme inactive de la protéine est caractérisée par une forme monomérique de la protéine. Lors de la liaison entre ComR et la phéromone mature XIP, une réaction de dimérisation de la protéine se produit et la protéine peut lier la molécule d’ADN. La forme active est donc caractérisée par un complexe symétrique à cinq partenaires composé de deux ComR, de deux XIP et de l’ADN. Actuellement, l’étude thermodynamique de l’assemblage du complexe actif est rendue difficile à cause de la symétrie du système. Le laboratoire d’accueil a démontré qu’il était possible de former ce complexe mais de manière asymétrique avec cinq partenaires différents. Pour y parvenir, 2 variants de ComR présentant respectivement 2 et 7 mutations ont été co-exprimés de manière à favoriser leur hétérodimérisation par liaison de deux phéromones peptidiques différentes, le XIPSth naturel d’une part et le XIP de Streptococcus vestibularis (XIPSve) d’autre part. L’objectif général dans lequel s’inscrit mon travail est d’étudier l’ordre d’assemblage du complexe ComR/ADN/XIP à l’aide de ce système asymétrique. Pour ce faire, nous réaliserons des analyses in vivo (western blot et analyse d’activité transcriptionnelle avec un système rapporteur basé sur la production de luciférase) et in vitro (retard sur gel et polarisation de fluorescence résultant de la formation des complexes) au départ de protéines qu’on aura purifiées. |
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| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | Laboratoire de Biochimie et Génétique des Microorganismes (BGM) - Louvain Institute of Biomolecular Science and Technology / UCLouvain |
| Département du TFE : | Chimie |
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