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Titre : | Mise au point dune PCR Multiplex pour la détection des facteurs de virulence de Clostridioides difficile |
Auteurs : | Sylwia Zakrzewska, Auteur ; AHALIEYAH Anantharajah, Promoteur |
Type de document : | Travail de fin d'études |
Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2022 |
Langues: | Français |
Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
Descripteurs : |
HE Vinci Clostridioides difficile |
Mots-clés: | infections à clostridium ; Clostridioides ; entérocolite pseudomembraneuse |
Résumé : |
Le but de ce projet est la mise au point dune PCR multiplex pour la détection des facteurs de virulence de C. difficile. Il sagit dune bactérie anaérobe responsable de diarrhées post-antibiothérapie. La pathogénicité de cette bactérie est déterminée par lexpression de différentes toxines : toxine A (TcdA), toxine B (TcdB) et la toxine binaire(CdtA&CdtB). La mise en place dune méthode permettant la détection de ces facteurs de virulence pourrait aider à caractériser la pathogénicité des souches de C. difficile envoyées au Centre Nationale de Référence lors de la surveillance nationale.
Pour cela, différentes techniques sont utilisées telles que : la culture bactérienne, lextraction dADN bactérien, la PCR, lélectrophorèse sur gel dagarose et lélectrophorèse capillaire. Premièrement, une culture microbienne est réalisée afin d'isoler des colonies pures de C. difficile. Deuxièmement, la PCR amplifie les séquences ciblées en 3 étapes. Troisièmement, l'électrophorèse sur gel d'agarose est utilisée pour optimiser différents paramètres (les amorces, les concentrations d'amorces, la température d'hybridation, ). Et enfin, l'électrophorèse capillaire permet d'obtenir des résultats plus précis et de valider le projet. Les résultats sont satisfaisants. Tout d'abord, des paramètres tels que les amorces utilisées, les concentrations en amorces, la température d'hybridation, la dilution de l'ADN sont optimisés à l'aide d'une électrophorèse sur gel d'agarose. De plus, l'électrophorèse capillaire est utilisée d'une part pour optimiser davantage les paramètres tels que la dilution des amplicons PCR et les concentrations d'amorces et d'autre part pour valider la méthode en traitant un grand nombre d'échantillons. En conclusion, les résultats de ce projet sont prometteurs et permettent de considérer la PCR Multiplex comme une option possible pour la surveillance nationale au sein du CNR. Néanmoins, d'autres tests doivent être effectués pour la valider en tant que méthode accréditée. |
Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
Disponible en ligne : | Oui |
Lieu du stage : | IREC/MBLG UCLouvain - Medical Microbiology Center |
Département : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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