| Titre : | Analyse de l’influence de mutations phosphomimétiques de la nucléoporine Nup98 sur le trafic nucléocytoplasmique |
| Auteurs : | Laura Ioannidis, Auteur ; Thomas Michiels, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2022 |
| Langues: | Français |
| Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
| Mots-clés: | Theilovirus ; Nup98 ; pore nucléaire |
| Résumé : |
Le virus de Theiler (TMEV) est un Cardiovirus faisant partie de la famille des Picornaviridae.
Ce virus est un virus à ARN à brin positif. Le TMEV provoque une infection démyélinisante persistante du système nerveux central des souris. La protéine virale L (pour "Leader") contribue à la persistance du virus en interférant avec les défenses de l'hôte. Le virus y parvient notamment en perturbant le trafic nucléocytoplasmique des protéines et de l'ARN de l'hôte. En effet, la protéine L recrute et active une kinase appelée RSK. Lorsque la protéine L interagit avec RSK, elle amène la kinase au complexe de pores nucléaires où elle phosphoryle les FG-Nups. Ces dernières sont des nucléoporines phénylalanine-glycine qui font partie du complexe des pores nucléaires et qui sont essentielles pour la translocation des protéines et de l'ARN à travers les pores. En hyperphosphorylant ces FG-Nups, RSK déstabilise probablement le pore nucléaire et provoque une perturbation du trafic nucléocytoplasmique. De plus, la protéine L inhibe également la kinase antivirale PKR. Cette kinase détecte l'ARN double brin produit par les virus et bloque la traduction virale. En inactivant la PKR,la protéine L empêche le fonctionnement du système immunitaire de la cellule. Mon projet au sein du laboratoire VIRO de l'Institut de Duve était basé sur ces deux activités de la protéine L. Nous voulions imiter la perturbation nucléocytoplasmique induite par la protéine L en l'absence d'infection pour voir si l'inhibition de PKR est une conséquence de la perturbation du trafic. Pour ce faire, nous avons construit un plasmide codant soit pour un mutant phosphomimétique de Nup98 (qui est un FG-Nup hautement phosphorylée lors de l'infection par le TMEV) soit pour une Nup98 de type sauvage (comme contrôle). En utilisant le système split-GFP, nous avons observé que dans les cellules transfectées avec nos constructions, le mutant de type sauvage et le mutant phosphomimétique de Nup98 étaient capables de co-localiser avec l'enveloppe nucléaire. À l'aide de cellules exprimant GFP-NES et RFP-NLS, nous avons également analysé la perturbation du trafic nucléocytoplasmique induite par Nup98 de type sauvage ou mutant surexprimé. Contrairement à ce qui était attendu, la Nup98 phosphomimétique n'a pas clairement perturbé le trafic nucléocytoplasmique, alors que la Nup98 de type sauvage l'a fait. Cependant, Nup98 de type sauvage s'est avéré plus exprimé que Nup98 phosphomimétique. Cette surexpression de Nup98 pourrait éventuellement être à l'origine de la perturbation du trafic nucléocytoplasmique |
| Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | Institut de Duve - Laboratoire de virologie |
| Département du TFE : | Biologie médicale |
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