| Titre : | Mise au point d’une PCR permettant de quantifier le provirus intégré du VIH-1. |
| Auteurs : | Justine Dessauvages, Auteur ; Géraldine Dessily, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2022 |
| Langues: | Français |
| Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
| Descripteurs : |
HE Vinci Réaction de polymérisation en chaîne ; VIH (Virus de l'Immunodéficience humaine) |
| Mots-clés: | virus de l’immunodéficience humaine de type 1 ; Répétition terminale longue du VIH ; Intégration virale |
| Résumé : |
Le virus de l’immunodéficience humaine de type-1 est le principal agent causal du syndrome de l’immunodéficience acquise (SIDA). Ce syndrome est la conséquence de longues années de destruction des cellules du système immunitaire, plus particulièrement les lymphocytes TCD4, par le virus. Ce qui rend l’individu immunodéprimé et sensible aux maladies opportunistes. Le VIH est un problème de santé publique à portée mondiale qui a entrainé 37 millions de décès. Aucun traitement ne permet une guérison totale et un traitement doit être suivi à vie. Seul un contrôle de la réplication virale est possible.
Une des techniques actuellement utilisées au LRS détecte l'ADN intracellulaire du VIH, ce qui permet principalement de diagnostiquer une infection chez le nouveau-né de mère séropositive. Cette technique est également utilisée en cas de tests de diagnostic sérologique discordants ainsi que lors de l’identification de patients à risque de développer le SIDA afin de mettre en place des thérapies précoces. Une détection plus sensible et spécifique du provirus permettrait de diagnostiquer l'infection plus tôt et de commencer le traitement plus rapidement. L'objectif principal du projet est donc de développer une PCR capable de quantifier le virus intégré dans le génome des cellules infectées. Pour y parvenir, la technique Alu-Gag a été exploitée, il s’agit d’une succession de deux PCRs qui permet de cibler l’ADN intégré du VIH. La première PCR est une PCR classique lors de laquelle la séquence d’ADN située entre la séquence virale Gag et la séquence Alu de génome humain est pré-amplifiée. La deuxième PCR est une Real-time PCR, elle cible les séquences LTR du virus. Ce qui permet, d’amplifier et quantifier le provirus. Suite aux différentes étapes effectuées pour mettre la PCR au point, les conditions validées de la première amplification sont : une concentration en amorces Alu et Gag de 0,15 µM, un volume d’ADN de 5 µL ainsi que l’application d’un touchdown lors de l’hybridation allant progressivement de 58°C à 63°C. Pour la deuxième amplification, les conditions validées sont : une concentration en amorces LTR R et LTR F de 0,3 µM et un concentration en sonde LTR de 0,2 µM. La sensibilité analytique est de 100 copies/PCR/5µL. Cependant, cette PCR ne peut pas être utilisée en routine car la fidélité intermédiaire n’est pas validée car de nombreux résultats n’entrent pas dans les intervalles d’acceptabilité. De plus, la répétabilité n’a pas pu être démontrée |
| Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | Université catholique de Louvain – IREC / Pôle MBLG |
| Département du TFE : | Biologie médicale |
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