| Titre : | Importance de la protéine Mla (VacJ) impliquée dans la maintenance de l’asymétrie de la membrane externe du Pseudomonas aeruginosa sur la réponse immunitaire induit par le lipopolysaccharide ; études préliminaires. |
| Auteurs : | Aissatou Barry, Auteur ; Marie-Paule Mingeot-Leclercq, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2022 |
| Langues: | Français |
| Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
| Descripteurs : |
HE Vinci Cytokines ; Interleukine-6 (IL-6) ; Réaction de polymérisation en chaine en temps réel |
| Mots-clés: | Pseudomonas aeruginosa ; Lipopolysaccharide ; Facteur de nécrose tumorale- alpha |
| Résumé : |
Le Pseudomonas aeruginosa est une bactérie à Gram négatif dont la membrane externe est constituée d’une bicouche de phospholipides et de lipopolysaccharides
(LPS). Le feuillet externe est principalement constitué de LPS et le feuillet interne de phospholipides. Cette asymétrie est maintenue par le Système Mla constitué de 6 protéines dont la protéine VacJ (situé au niveau de la membrane externe) et les enzymes PagP et PldA. L’objectif de ce travail est de caractériser l’influence possible de VacJ, une protéine impliquée dans le maintien de l’asymétrie membranaire de Pseudomonas aeruginosa, sur la réponse immunitaire de cellules THP-1 (macrophages humains). Dans un premier temps, on a effectué des extractions de LPS P. aeruginosa à partir de deux souches : une souche Wild-type et une souche ΔVacJ (où la protéine VacJ a été délétée), chacune traitée ou non avec de la colistine (1µg/ml), un antibiotique stimulant. Trois méthodes d’extractions ont été testées : la méthode de Bligh-Dyer, la méthode hot aqueous-phenol, et le kit INTRON. Après les extractions, on va quantifier le LPS extrait pour chaque condition par un dosage colorimétrique avec le test le réactif de Purpald. La méthode d’extraction hot aqueous-phenol sera abandonnée car il n’y a pas de différence de concentration. La méthode de Bligh-Dyer sera également abandonnée car la sensibilité est très faible et elle est plus adaptée pour l’extraction des glycérophospholipides. Ainsi, les échantillons extraits avec le kit INTRON seront retenus pour les futures analyses. Car avec ce kit, on a obtenu un pourcentage de récupération de 95% et d’après la firme, la sensibilité et la spécificité sont très bonnes. Dans un deuxième temps, afin de comparer les macrophages muris (J774) et les macrophages humains (TPH-1), les cellules J774 ont été incubées avec du LPS extrait pour effectuer un dosage des cytokines TNF-α, IL-6 et IL-8 par le test ELISA. Malheureusement, nous n’avons pas pu aller au bout des expériences pour les tests ELISA et qPCR. Par conséquent, il n’a pas été possible de quantifier ou d’identifier si toutes les cytokines d’intérêt ont été sécrétées. Et, la suite du projet sera réalisée sur de cellules THP-1 qui sont des cellules de macrophages humains. Finalement, un 4 dosage par ELISA et par qPCR sur les cellules THP-1 des cytokines TNF- α, IL-6 et IL-8 seront réalisés par une autre personne |
| Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | Louvain Drug Research Institute (LDRI) -Cellular and Molecular Pharmacology unit (FACM) |
| Département du TFE : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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