| Titre : | Optimisation du protocole de la technique de MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification) |
| Auteurs : | Taissir Ali Mohamed, Auteur ; Laurence Desmyter, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2022 |
| Langues: | Français |
| Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
| Descripteurs : |
HE Vinci Réaction de polymérisation en chaine multiplex |
| Mots-clés: | Maladies chromosomiques ; Variations du nombre de copies d’un segment d’ADN |
| Résumé : | La MLPA (Multiplex Amplification Probe Ligation) est la technique de référence en routine clinique pour la détection des variations du nombre de copies de gènes cibles. Cette méthode moléculaire semi-quantitative, basée sur une PCR multiplexe, permet d’identifier les délétions et duplications d’un ou plusieurs gènes associés à certaines maladies génétiques. Malgré sa sensibilité et spécificité, diverses contraintes rencontrées en routine affectent la qualité et la fiabilité des résultats augmentant ainsi le délai de réponse qui peut être critique dans certains cas (diagnostic prénatal ou néonatal). C’est dans ce contexte que ce travail a été réalisé visant à améliorer le protocole existant de la technique en vue d’optimiser le rendement des analyses MLPA. Une nouvelle version optimisée du protocole a été éditée suite aux recommandations du dernier Protocole Général MLPA publié par MRC Holland. Les résultats des échantillons de mauvaises qualités (ADNs purifiés, n=8), précédemment analysés au laboratoire, ont été de meilleure qualité une fois testés avec le nouveau protocole augmentant ainsi de 20% les échantillons techniquement validables. Ensuite, plusieurs expériences ont été réalisées visant à comparer les données de qualité obtenues à partir des échantillons d’ADNs purifiés vs non-purifiés (n=32). Globalement, nous avons remarqué que le classement des scores et paramètres de qualité étaient très similaires entre les deux types d’échantillons et ce pour les kits MLPA classique avec ou sans traitement à l’ARNase. Il est important de noté qu’en termes de classement, le paramètre de qualité lié au profil du spectre obtenu par eléctrophérogramme était moins bon dans les échantillons non-purifiés par rapport aux purifiés. Cependant, ce facteur n’a pas été contraignant pour la validation technique de nos expériences car après une correction, le logiciel a déterminé des scores finaux (CAS) satisfaisants. Des analyses supplémentaires sont néanmoins nécessaires afin de démontrer la nécessité de la purification de l’ADN pour des résultats optimaux et ce pour les divers kits MLPA utilisés au laboratoire. |
| Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | Hopital Erasme LHUB-ULB Laboratoire de génétique moléculaire |
| Département du TFE : | Biologie médicale |
Documents numériques (1)
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