| Titre : | Caractérisation in vitro des activités promiscuitaires de mutants de l’alanine racémase de Streptococcus thermophilus et de l’impact des mutations sur le fitness de la bactérie |
| Auteurs : | Jeffrey Hoylaerts, Auteur ; Patrice Soumillion, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2022 |
| Langues: | Français |
| Index. décimale : | TFE - Chimie |
| Mots-clés: | Alanine racémase ; activités promiscuitaires ; cinétique ; acides aminés ; compétition bactérienne ; Streptococcus thermophilus ; M17 ; adaptabilité |
| Résumé : | Streptococcus thermophilus est une bactérie dont le milieu naturel est le lait. Il possède une enzyme particulière appelé alanine racémase (Alr) qui permet de racémiser de l’alanine levogyre en dextrogyre et inversément. Cette aptitude est nécessaire à la survie de la bactérie qui incorpore la D-alanine dans sa paroi. La spécificité de l’enzyme n’est pas absolue et elle est susceptible de racémiser d’autres acides aminés ce qui pourrait impacter le fitness de la bactérie. L’objectif de ce stage sera de détecter ces activités promiscuitaires in vitro et de les quantifier pour des enzymes dont l’entrée du site actif est affectée par mutation. Ces mutations ont préalablement été sélectionnées car elles confèrent vraisemblablement un avantage de croissance à la bactérie cultivée dans un milieu artificiel (M17). Notre objectif est également de vérifier cette hypothèse en réalisant des expériences de compétition in vivo entre la forme sauvage et des formes mutées de la bactérie en comparant le milieu naturel et artificiel. Les activités promiscuitaires de l’enzyme sauvage et de deux variants, D170E et R288K, ont été évaluées sur une dizaine d’acides aminés différents. Nous avons observé une augmentation systématique de ces activités pour le variant R288K qui peut être expliquée par un site actif plus ouvert, donc plus accessible. Les expériences de compétition ont montré que la bactérie sauvage est mieux adaptée que les mutants dans le milieu M17 et moins bien adaptée dans le lait. Ces observations sont à l’opposé de ce qui était attendu mais des hypothèses sont émises afin d’expliquer ce phénomène. |
| Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | Place Croix du Sud 4-5 bte L7.07.06 (UCL) |
| Département du TFE : | Chimie |
Documents numériques (1)
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