| Titre : | Détection et typage de Borrelia burgdorferi sensu latopar biologie moléculaire dans un cadre accrédité |
| Auteurs : | Elisabeth Franchimont, Auteur ; Benoît Kabamba-Mukadi, Promoteur |
| Type de document : | Travail de fin d'études |
| Editeur : | Woluwe-Saint-Lambert : Haute École Léonard de Vinci, 2021 |
| Langues: | Français |
| Index. décimale : | TFE - Biologie médicale |
| Descripteurs : |
HE Vinci Analyse de séquence ; Borreliose ; Erythème ; Maladie de Lyme ; Neuroborréliose de lyme ; Réaction de polymérisation en chaîne ; Tiques |
| Mots-clés: | Borrelia burgdorferi ; Ixodes ; Flagelline |
| Résumé : | Le diagnostic de la Borréliose de Lyme, une maladie infectieuse non contagieuse transmise à l'homme par la morsure de tique du genre Ixodes, est très difficile. En fait, l'érythème migrant est le seul symptôme spécifique de la maladie. D'autres manifestations doivent être accompagnées par des tests de laboratoire pour confirmer la Borréliose de Lyme. Les objectifs de ce travail étaient de transposer et d'optimiser le diagnostic moléculaire de la maladie de Lyme, réalisé aux cliniques universitaires Saint-Luc vers le Centre National de Référence de Borrelia. De plus, les exigences de validation ont été vérifiées afin de garantir la performance de la méthode analytique qualitative mise au point en laboratoire. En effet, le Centre National de Référence de Borrelia est un laboratoire accrédité qui doit respecter les normes de qualité propres au laboratoire de biologie médicale (norme ISO 15189). À cette fin, deux méthodes d'extraction ainsi que deux master mix différents de PCR ont été comparés. L'identification de l'espèce Borrelia par séquençage Sanger ainsi que des critères de validation de méthode ont également été évalués. L'extraction MagNaPure Compact a donné des meilleurs résultats avec un Cq plus bas. Pour le choix de la concentration d'amorces, la fluorescence des fragments sur gel d'agarose était plus forte avec 0,5 μmol d'amorces. Les séquences nucléotidiques obtenues étaient parfaitement interprétables.La qPCR et le séquençage ainsi développés ont été appliqués à des échantillons d'ADN extraits de tiques du bois de Lauzelle à Louvain-la-Neuve, dans le cadre d'une étude menée par l'UCLouvain. Si l'on considère que chacune des 5 Borrelia détectées infecte une seule tique, la prévalence des tiques infectées est de 5,68%.Sur la base de nos résultats, nous pouvons conclure que les conditions optimales pour la détection de l'ADN de Borrelia sont: l'extraction avec l'extracteur MagNa Pure Compact, une concentration d'amorces à 0,5 μmol ciblant les gènes Flagellin et OspA et l'amplification de l'ADN par PCRen temps réel. |
| Accès : | Identifiez-vous avant d'accéder au document électronique |
| Disponible en ligne : | Oui |
| Lieu du stage : | IREC/MBLG Pôle de microbiologie Médicale à l’UCLouvain |
| Département du TFE : | Biologie médicale |
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